Extracción y Purificación de Ácidos Nucleicos por Perlas Magnéticas

Sistema de extracción de ácido nucleico-03

La extracción de ácidos nucleicos (ARN y ADN), mediante el método de perlas magnéticas se basa principalmente en hibridación complementaria entre el ácido nucleico y las perlas, para su posterior aislamiento medido por campos magnéticos.

El proceso consta de 3 fases: unión, lavado y elución. A través de la unión selectiva de ADN en medios saturados con sales y su recuperación es fácilmente llevada a cabo por un imán.

¿Cómo funciona este proceso?

Las muestras tomadas e inactivadas con el Medio de transporte, son dispensadas dentro de la placa con pocillos previamente llenado con los compuestos encargados de realizar la lisis y extracción de ácidos nucleicos.

La posterior separación requiere pasos de precipitación selectiva con aislamiento específico libre de nucleasas con tiocianato de guanidinio, combinado con etanol y como paso final enjuague con agua libre de RNAsas.

El traspaso entre pocillos de reacción es medido por un soporte que obtiene un momento magnético cuando se expone a un campo magnético, permitiendo su desplazamiento y su eliminación fácilmente utilizando un imán permanente. Esta es una forma rápida, simple y eficiente de separar las partículas después del paso de elución o unión nucleica y un método mucho menos riguroso que las técnicas tradicionales.

Las perlas magnéticas son la clave para desarrollar este método, su tamaño aproximadamente es entre 0.5 y 10 µm, sintetizadas a partir de biopolímeros, vidrio poroso o materiales magnéticos inorgánicos como el óxido de hierro. Son especialmente adecuadas para su afinidad con las moléculas de ácidos nucleicos. Además, son capaces de no retener magnetismo una vez el campo magnético haya sido eliminado, evitando así su aglutinamiento entre ellas para asegurar una fácil suspensión de las partículas y una extracción uniforme de ácido nucleico.

¿Por qué utilizar este sistema?

Este sistema tiene la principal ventaja que nos permite un aislamiento, extracción y purificación de ADN o ARN con un rendimiento superior al 90% con mucho menos esfuerzo que los métodos manuales o convencionales.

Dentro de las aplicaciones posteriores que requieren moléculas de ácidos nucleicos puros, muchas de ellas no se pueden llevar a cabo con el material de muestra crudo, debido a la cantidad de contaminantes celulares (proteínas o carbohidratos), que acompañan a la muestra. Frente a esto el método de perlas magnéticas es la opción más eficaz, fiable y reproducible para el aislamiento de ADN y ARN.

Su uso para el Diagnóstico de Covid-19

Frente a la emergencia sanitaria y la necesidad de mayor capacidad de análisis, el método de perlas magnéticas resulta un gran aliado debido a su viabilidad y rendimiento en el procesamiento de altas cantidades de muestras derivadas de pacientes sintomáticos.

La extracción cuantitativa de ácidos nucleicos con alta pureza a partir de muestras crudas (sangre, mucosa nasal, oral, frotis, etc.), son el requisito previo para ensayos eficaces de RT-PCR. Evitando así la presencia de falsos positivos en el diagnóstico de la enfermedad.

 

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A pesar de la generalidad del método en la extracción de ácidos nucleicos, es posible el aislamiento específico de la molécula deseada. Con el fin de eliminar el ARN del ADN, es recomendable la adición de una ARNasa, o viceversa, el ARN se puede separar si el ADN se degrada con la ADNasa.

Nuestro kit de diagnóstico para Covid- 19 utiliza el método de perlas magnéticas junto a un sistema de tampón de separación única, permitiendo aislar y purificar ácidos nucleicos virales de alta calidad en las muestras.

Las perlas magnéticas utilizadas en el kit de extracción, están especialmente revestidas teniendo una fuerte afinidad por el ácido nucleico de la muestra en determinadas condiciones. Cuando las condiciones cambian, las perlas magnéticas liberan el ácido nucleico adsorbido, de modo que el ácido nucleico de la muestra purificada se puede extraer rápidamente.

Mediante el Kit de diagnóstico y el Equipo Automatizado de Extracción y Purificación de ácidos nucleicos, se automatiza el proceso permitiendo que laboratorios analicen un mayor número y volúmenes de muestra al mismo tiempo.

El tiempo necesario de trabajo del kit de extracción, es de 30 min, incluyendo la preparación de la muestra y aislamiento de ácidos nucleicos. Reduciendo el tiempo requerido para el ensayo de PCR.

 

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La simplificación del proceso que ofrece el kit de extracción, hace que el método sea más atractivo y principalmente más efectivo para su uso en laboratorios de diagnóstico de rutina, especialmente para la detección de patógenos respiratorios mediante RT-qPCR multiplex.

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