Prueba de Antígeno, una herramienta para detectar Covid–19 e Influenza A y B

El SARS-CoV-2 virus que conllevó a una pandemia, debido a su eficaz transmisión no sólo por parte de personas sintomáticas, sino incluso por asintomáticos y pre-sintomáticos.

Los países que han tenido éxito en el control de la pandemia lo han conseguido mediante el uso de medidas de Bioseguridad que contribuyen a la reducción de la transmisión, unidas a una política activa de rastreo y aislamiento de los sujetos infectados y la cuarentena de sus contactos al realizarse una de las diferentes pruebas presentes que detectan a este virus. Sin embargo, la influenza (gripe) y el Sars-CoV-19 son enfermedades que afectan al sistema respiratorio, pero son provocadas por diferentes virus.

El COVID-19 es causado por la infección de un nuevo coronavirus conocido como SARS-CoV-2 y la influenza es causada por la infección de los virus de la influenza. Los síntomas de la influenza y el COVID-19 son muy similares, lo que dificulta distinguir entre ambas enfermedades basándose solo en los síntomas, y por el impacto de la temporada invernal podría existir confusiones o expectativas falsas en los pacientes. De tal manera, es necesario realizar una prueba de detección para ayudar a confirmar el diagnóstico.

Actualmente, las pruebas RT-PCR y las de Antígenos, Flu A y B (Ag) mantienen una alta demanda y ayudan a determinar el tipo de enfermedad.

Nuestros test de Antígenos, Flu A y B, también conocido como prueba de diagnóstico, se realiza mediante muestra de hisopado nasal, nasofaríngeo u orofaríngeos, se basa en métodos de inmunodetección, que detecta la envoltura de las proteínas presentes en el virus y determina el tipo de infección que presente el paciente ya sea Sars-CoV-19, influenza A y B. (Procedimiento similar a la prueba PCR)

El test de antígeno es un método innovador de prueba de diagnóstico diseñado para la detección rápida del virus por influenza o COVID-19, es más rápida, fácil y aplicable en los diferentes laboratorios clínicos, permitiendo manejar los casos detectados y de ser necesario realizar el aislamiento de los pacientes, reduciendo así los contagios evitando la propagación del virus o prescribir medicamentos para combatir el tipo de influenza.

Estas pruebas tiene aval de la FDA (Food and Drug Administration), los CDC (Centro para Control de Enfermedades) de Estados Unidos, la OMS (Organización Mundial de la Salud) y aprobadas por el ARCSA en el Ecuador.

La PCR y los test de antígenos tienen una sensibilidad y especificidad similar, pero esta última no reemplaza a la PCR. Sin embargo, mantienen una rapidez en facilitar los resultados para interpretación y el costo por debajo de una PCR, hacen de esta prueba una alternativa muy atractiva para evitar rebrotes.

Es muy importante considerar que para la confirmación certera de diagnóstico es útil y necesario una RT-PCR dado que es capaz de detectar pequeñas secuencias del genoma viral en tiempo real, es la más recomendada a nivel mundial por sus resultados precisos.

No obstante, las pruebas de antígenos son efectivas especialmente en la etapa inicial de la infección, si se excede a los 10 días de haber presentado síntomas, se reduce la confiabilidad de los resultados, estos test no tienen validez para pacientes con baja carga viral o asintomáticos, pero se recomiendan realizarlas dentro de un cerco epidemiológico, en atención primaria, en personas que habitan en zonas rurales, zonas que presentan alta incidencia de virus, con el propósito de obtener una respuesta inmediata y se lleven a cabo las acciones necesarias.

¿Cómo se toma la muestra para la prueba de Antígeno Covid – 19, influenza A y B?

  •  Muestra de hisopo nasal
  • Muestra de hisopado orofaríngeo (opcional)
  • Muestra de hisopado nasofaríngeo (opcional)

¿Cuánto tiempo para obtener el resultad?

 El período de tiempo es entre 10 a 15 minutos.

 ¿Se requiere de otra prueba?

 Generalmente, los resultados positivos son muy precisos. Es posible que sea necesario confirmar los resultados con una prueba molecular (PCR).

 ¿Qué muestra la prueba?

 Diagnostica una infección activa de SARS-CoV-19.

 ¿Cómo se interpretan los resultados en una prueba de antígenos para Covid-19?

Para SARS-CoV-2 Ag:

  • Resultado positivo: Aparecen tanto la línea de control de calidad C como la línea de detección Cov.
  • Resultado negativo: Solo aparece la línea de control de calidad C, sin que aparezca ninguna otra línea en la línea de detección.
  • Resultado inválido: La línea de control de calidad C no aparece, lo que indica que la prueba no es válida, sin importar si la línea de detección aparece o no. Recoja una nueva muestra y realice otra prueba con un nuevo dispositivo de prueba.

Para Para Flu A/Flu B Ag:

Resultados positivos:

  •  Antígeno de influenza A positivo: Aparecen tanto la línea de control de calidad C como la línea de detección de influenza A, mientras que la línea de detección de influenza B no aparece.
  • Antígeno de influenza B positivo: Aparecen tanto la línea de control de calidad C como la línea de detección de influenza B, mientras que la línea de detección de influenza A no aparece.
  • Antígeno positivo de influenza A y B: Aparecen las 3 líneas, incluida la línea C de control de calidad y las líneas de detección de influenza A e influenza B.

Resultado negativo:
Solo aparece la línea de control de calidad C, sin que aparezca ninguna otra línea en la línea de detección de influenza A o influenza B. Indica que el resultado de la prueba es negativo para los antígenos de la influenza A y de la influenza B.

Resultado inválido:

La línea de control de calidad C no aparece, lo que indica que la prueba no es válida, sin importar si la línea de detección de influenza A o influenza B aparece o no. Recoja una nueva muestra y realice otra prueba con un nuevo dispositivo de prueba.

Es posible implementar la prueba Covid-19 en tu laboratorio, tanto por PCR en tiempo real como por pruebas de antígenos. Nuestro equipo de profesionales te asesorará en el proceso de implementación y puesta en marcha del proyecto en función de tus necesidades. Te brindamos asesoramiento y atención según tus requerimientos.

                                     

examen para covid-19

¿Qué equipos necesita mi laboratorio para pruebas PCR Covid-19?

La OMS publicó el 17 de enero una Guía provisional para la prueba en laboratorio del nuevo coronavirus (COVID-19) en pacientes humanos posiblemente contagiados recomendando cuatro protocolos de prueba: RT-PCR, protocolos de detección de ácido nucleico en desarrollo, secuenciación de genoma completo y pruebas serológicas de muestras pareadas.

Tomando en consideración estas recomendaciones,  queda claro que para poder realizar la evaluación de los casos del nuevo coronavirus (SARS-CoV-2) se requiere contar con un laboratorio equipado para este tipo de ensayos. El protocolo mediante RT-PCR es el procedimiento más utilizado actualmente, debido a que proporciona resultados altamente confiables; este tipo de ensayos son realizados en hospitales, clínicas y laboratorios  públicos o privados acreditados.

Para este análisis se debe contar con ciertos equipos entre los que se destacan: centrífugas, cabinas de bioseguridad tipo II y por supuesto, el equipo de detección PCR en tiempo real.

Centrífugas

Una centrífuga es un equipo de laboratorio que genera movimientos de rotación, tiene el objetivo de separar los componentes que constituyen una sustancia. Por lo general, la centrífuga es utilizada en los laboratorios como proceso de la separación de la sedimentación de los componentes líquidos y sólidos, por ejemplo, para el análisis de la sangre permite separar el plasma del resto de componentes (glóbulos rojos, glóbulos blancos, plaquetas, entre otros). En los ensayos de Covid-19 se realizará la centrifugación como paso previo a la amplificación por PCR.

Existen diferente tipos de centrífugas como centrifugas de baja velocidad, centrífugas para micro hematocritos, y ultracentrífugas, este último tipo generalmente se utiliza para la separación de las proteínas. Pero cada uno de ellos tiene diferentes velocidades:

  • Macro centrífuga que va desde los 2.000 y 6.000 R.P.M.
  • Micro centrifugas entre 10.000 y 18.000 R.P.M
  • Ultracentrífugas que va desde 20.000 y 75.000 R.P.M.

Dependiendo del tipo de centrifuga cada una tendrá un diferente funcionamiento y características (tipo de rotor y tipo tubo porta muestras). En el caso de su control eléctrico, siempre va a disponer de diferentes elementos como el control del tiempo, el control de temperatura, control de refrigeración, velocidad de rotación, entre otras. Las centrífugas Eppendorf, son reconocidas a nivel mundial por su gran calidad y confiabilidad, cuentan con diferentes modelos adaptados a cada necesidad particular, entre ellas podemos destacar las siguientes, clasificadas de mayor a menor capacidad:

Centrífuga Refrigerada 5810R ofrece la solución más rentable para sus aplicaciones de rendimiento medio a alto. Combina una extraordinaria versatilidad y capacidad para tubos y placas con una huella compacta extraordinaria. Con la nueva generación de rotores, la capacidad de Centrifuge 5810/5810 R aumenta al máximo. 4 × 750 ml (o máx. 28 × 50 ml / 56 × 15 ml). Es la centrífuga de 3 litros más compacta actualmente disponible.

Centrífuga refrigerada 5424 R es el estándar de laboratorio cuando se trata de un rendimiento de enfriamiento eficiente (por ejemplo, enfriamiento rápido desde temperatura ambiente hasta temperatura establecida) en un diseño de producto muy ergonómico. Cuenta con tecnología de enfriamiento de última generación para garantizar una precisión de alta temperatura para una protección máxima de la muestra y los mejores resultados de separación. Ideal para uso diario en laboratorio.

Minicentrífuga personal Minispin de Eppendorf pequeña pero de gran potencia y extremadamente silenciosa, definida como una microcentrífuga “personal” ideal para la realización de un amplio espectro de separaciones biomoleculares y centrifugaciones rápidas (quick spins).  El rotor, la tapa de la centrífuga interna y el pestillo de la tapa están hechos de metal para una máxima seguridad de operación. Hay dos modelos disponibles para satisfacer sus requisitos de rendimiento: Minispin y Minispin plus.

Los procesos de centrifugación, sonicación y agitación de muestras son procedimientos que pueden generar aerosoles de partículas finas por lo que se recomienda realizarlos dentro de una cabina de seguridad biológica tipo II.

 

Cabinas de Bioseguridad

Las BSC (Cabina de Seguridad Biológica) de clase II están equipadas con luz UV la cual tiene acción germicida, estas cabinas  proporcionan 3 niveles de protección: protección del personal (el usuario), protección del producto (la muestra) y protección del medio ambiente (el laboratorio) por lo que son una opción ideal para trabajar con muestras de COVID-19. En ese sentido, como distribuidores autorizados de Labconco, ponemos a disposición 3 modelos de cabinas de bioseguridad:

Cabinas de seguridad Biológica Tipo II A2 se le conoce como cabina combinada. Puede conectarse mediante un ducto y se le denomina como B3. Si carece del mismo es un tipo A:Recicla el 70% del volumen dentro de la cabina. El sistema de filtración es mediante filtros HEPA y es adecuada para trabajar con agentes clasificados con nivel de bioseguridad 1,2,o 3.

Cabinas de seguridad Biológica Tipo II B2 se le conoce como cabina de extracción total. No tiene ningún tipo de recirculación. El sistema de filtración es mediante filtros HEPA y es adecuada para trabajar con agentes clasificados con nivel de bioseguridad 1,2,o 3. Todos los ductos bilógicamente contaminados presurizados negativamente. Dispone de ducto de extracción , permite trabajar con químicos tóxicos y radionucleidos.

Cabinas de seguridad Biológica Tipo II C1 esta cabina híbrida, se puede utilizar en una recirculación de tipo A con modo de trabajo microbiológico estándar, o puede ser conectado a un sistema de escape para funcionar en modo de tipo B para la manipulación de vapores químicos peligrosos o radionúclidos.

Se recomienda activar la luz ultravioleta (UV) siempre antes y después de trabajar, dejando la luz UV conectada con la campana en posición cerrada el tiempo recomendado (nunca cuando se está trabajando o hay alguien en el laboratorio). Se puede utilizar la luz UV para esterilizar material de laboratorio no desechable (pipetas, adaptadores de centrífuga, material de vidrio, etc). En nuestro próximo blog se hablará de la importancia del proceso de esterilización y los tipos de esterilización que se pueden aplicar. Aunque se conoce poco de este nuevo virus y la información es en ocasiones poco clara, las precauciones al trabajar con muestras para realizar las pruebas de PCR en tiempo real de COVD-19, es necesario tomar todas las precauciones del caso. Se debe evitar realizar fuera de CSB clase II procedimientos manuales que impliquen la manipulación de muestras potencialmente contaminadas (alicuotado, dilución, agitación, apertura de tubos, bulk lysis). 

 

PCR en tiempo Real

Esta prueba se basa en la reacción en cadena de la ADN polimerasa (PCR por sus siglas en inglés) donde un fragmento de ADN conocido es copiado y amplificado billones de veces. El producto del PCR (punto final) es posteriormente visualizado en un gel de agarosa y proporciona evidencia cualitativa de la presencia de ese fragmento de ADN en la muestra. La PCR en tiempo real es una modalidad del PCR de punto final, donde la acumulación de ADN amplificado es detectado y cuantificado a medida que la reacción avanza, es decir: “En tiempo real” esto se logra incorporando una molécula fluorescente que se asocia al ADN amplificado, donde el incremento de esta fluorescencia es la proporcional al incremento de la cantidad de moléculas de ADN amplificadas en la reacción.

Los protocolos de la PCR en tiempo real pueden diseñarse para obtener resultados cuantitativos así como demostrar la presencia o ausencia de un fragmento de ADN o ARN o resultados cuantitativos calculando el número de copias de ADN, que al compararse con una curva estándar, establece la cantidad de microorganismos presentes en una muestra determinada o bien determinar el número de moléculas de un ARN para designar la expresión de este por ejemplo.

Actualmente, debido a la pandemia debida al coronavirus esta técnica es de vital importancia para un diagnóstico acertado, en ese sentido ponemos a  consideración el equipo PCR en tiempo real de Sansure Biotech, el cual posee dos bloques de reacción 48/48 es decir podrá realizar dos ensayos diferentes simultáneamente, cuenta con 6 juegos de combinaciones de filtros para excitación y emisión para resultados precisos. Incluye software multitarea con herramientas para el análisis de datos.

Otros equipos de uso rutinario en el laboratorio incluyen micropipetas de rango variable, vortex de agitación para homogenización de muestras, estufas de secado, autoclaves para esterilización de material, entre otros. Nuestra misión como proveedores es la de suministrar equipos e insumos adecuados y necesarios para equipar su laboratorio y enfrentar esta crisis sanitaria.

Para más información sobre equipos puedes consultar nuestro catálogo «Equipamiento de Laboratorio para prueba PCR Covid-19»

Contamos con asesores especializados que podrán asistirte en tu compra según tus requerimientos, déjanos tu correo y nos pondremos en contacto.

                                     

Como funcionan las pruebas rápidas

¿Cómo funcionan las pruebas rápidas?

A partir de los últimos meses hemos escuchado acerca de las pruebas rápidas, pero ¿qué son las pruebas rápidas? ¿cómo funcionan? Te lo explicamos a continuación:

El test rápido SARS-COV-2 IgM/IgG (COVID-19 IgM/IgG) es una prueba de diagnóstico in vitro para la determinación cualitativa de los anticuerpos IgM e IgG de SARS-COV-2 en sangre humana (yema del dedo / venas), suero o plasma. El diagnóstico serológico es importante para los pacientes que se presentan tarde, con una carga viral muy baja, a menudo por debajo del límite de detección de los ensayos basados en PCR.

El proceso para realizar las pruebas rápidas es mucho más simple, económico y de bajo riesgo, a diferencia de las pruebas moleculares (por PCR en tiempo real),  que requieren mayor tiempo de ejecución y operadores especializados, factores que limitan su uso cuando se requiere un diagnóstico rápido para tomar decisiones inmediatas de intervención.

Este ensayo inmunocromatográfico «in vitro» de lectura visual para la detección cualitativa de anticuerpos en suero, plasma y sangre entera consta de un cassette plástico que contiene:

  • Una membrana de nitrocelulosa sensibilizada con antígenos recombinantes en la zona de prueba.
  • Un parche impregnado con antígenos recombinantes específicos para IgM e IgG conjugados a oro coloidal.
  • Además posee un parche para el control positivo la cual siempre deberá de marcarse para asegurar la calidad del producto.

Es importante destacar que los resultados de las pruebas de anticuerpos IgM / IgG no deben usarse como la única base para diagnosticar o excluir la infección por SARS-CoV-2 (COVID-19) o para informar el estado de la infección. Para diagnósticos más específicos se debe realizar pruebas por PCR en tiempo real, que confirmen el diagnóstico, en laboratorios acreditados, que complementen el análisis el paciente.

Adicionalmente estas pruebas rápidas deben tener registro santiario, certificado CE y FDA. Su comercialización debe realizarse por empresas dedicadas a la salud, con experiencia en esta área, que pueda brindar un asesoramiento de calidad. 

Prueba Rápida Cassette

Pasos de uso del kit: 

  • Agregue 10ul de muestras.
  • Agregue dos gotas de buffer.
  • Leer el resultado en 15 minutos, (pasado los 20 min no es válido).

Pruebas Rápidas Covid-19

INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS

Resultado positivo:

1) El anticuerpo COVID-19 IgM se detecta si la línea de control de calidad C y la línea de detección IgM están coloreadas, y la línea de detección IgG no está coloreada, eso significa que el anticuerpo COVID-19 IgM es positivo.

2) El anticuerpo IgV COVID-19 se detecta si la línea de control de calidad C y la línea IgG de detección están coloreadas, y la línea IgM de detección no está coloreada, lo que significa que el anticuerpo IgG COVID-19 es positivo.

3) Los anticuerpos COVID-19 IgG e IgM se detectan si la línea de control de calidad C, la línea de detección IgM e IgG son de color, lo que significa que los anticuerpos COVID-19 IgG e IgM son positivos.

Prueba rápida positivo

Resultado negativo:

Si solo hay una línea de control de calidad C coloreada, las líneas de detección IgG e IgM no están coloreadas, el anticuerpo COVID-19 IgM / IgG no se detecta, lo que significa que el resultado es negativo.

Prueba rápida negativa

Resultado inválido:

Si la línea de control de calidad C no está coloreada, no importa si la línea de detección IgG / IgM está coloreada o no, el resultado no es válido y debe probarse nuevamente.

Prueba rápida inválida

Contamos con asesores especializados que podrán asistirte en tu compra según tus requerimientos, déjanos tu correo electrónico para proporcionarte más información.