La cromatografía líquida de alta resolución (HPLC) es una técnica analítica utilizada para identificar los componentes de una mezcla y separar mezclas de compuestos muy similares.
El HPLC se puede utilizar para separar los constituyentes de un compuesto, indicando cuánto de cada compuesto se encuentra dentro de la mezcla y ayuda a identificar qué es cada compuesto.
HPLC es la técnica de elección cuando se analizan materiales para una amplia gama de compuestos orgánicos. HPLC es aplicable a una variedad mucho mayor de mezclas, incluidas las moléculas no volátiles o térmicamente inestables. Sus ventajas incluyen versatilidad, sensibilidad y aplicabilidad a mezclas muy complejas.
La separación mediante cromatografía líquida de alta resolución se basa en la afinidad de los diferentes compuestos dentro del analito con la fase móvil (eluyente) y la fase estacionaria. Las interacciones intermoleculares específicas entre las moléculas de un componente de la muestra y el material de relleno dan como resultado, en efecto, que estas moléculas pasen transitoriamente a la fase estacionaria.
Cuanto mayor sea la interacción con la fase estacionaria en comparación con la fase móvil, mayor será el tiempo de interacción con la fase estacionaria, mayor el tiempo dedicado a la columna y mayor el tiempo de retención (Rf) para ese componente. El poder de la técnica proviene de la amplia gama de fases móviles y estacionarias que pueden usarse para afinar las separaciones.
La cromatografía líquida es una técnica cromatográfica extremadamente potente y de uso común, con aplicaciones en áreas como laboratorios farmacéuticos, bioanalíticos, de alimentos y bebidas, clínicos, forenses, ambientales y de desarrollo de fármacos.
Entre los tipos cromatografías tenemos:
| HPLC de fase normal
| Fase estacionaria es no polar y la fase móvil es polar. |
| Fase inversa
| Se utiliza una fase móvil polar, tal como agua y un disolvente orgánico polar, con una fase estacionaria hidrófoba no polar. |
| Elución isocrática vs gradiente
| se mantiene un gradiente constante en la fase móvil, mientras que una elución en gradiente se refiere a un experimento en el que varía la concentración de la fase móvil. |
Nuestro equipo CHROMASTER marca Merck cumple con tres componentes críticos en HPLC:
- Rendimiento.
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- Confiabilidad.
Chromaster de VWR-Hitachi con Software OpenLab – Sistema HPLC
La reputación de Hitachi en robustez y confiabilidad de instrumentos continúa con el Chromaster, que está hecho con materiales más fuerte y está fabricado con el estricto control de calidad de estándares Hitachi.
Está compuesto por varios módulos como se observa en la figura a continuación:
El sistema de cromatografía líquida incluye:
- Bomba modo gradiente.
- Inyector automático.
- Gradiente con mezclador dinámico.
- Desgasificador de solventes.
- Horno de columna.
- Detector (DAD, FID, IR, UV-VIS, etc).
- Celda de flujo estándar.
- Interfaz de datos.
- Software de Cromatografía para Especialistas de Cromatografía CLARITY u OPEN LAB.
Los análisis cromatográficos dependen increíblemente de la pureza del agua. El uso de una fuente de agua impura para preparar eluyentes, blancos, muestras y estándares podría introducir contaminación en el experimento, degradando el rendimiento cromatográfico al afectar la resolución, la integración y las líneas base. Dado que el agua es el reactivo que se utiliza en mayor volumen en HPLC, es vital que el agua elegida tenga la pureza correcta requerida para la sensibilidad de la aplicación.
Para experimentos de HPLC donde las aplicaciones tienen una sensibilidad general, recomendamos agua Tipo II+. Cuando la sensibilidad de la aplicación sea alta, se debe usar agua ultrapura Tipo I+ ya que tiene una resistividad de más de 18 MΩ.cm, un valor de TOC de menos de 2 ppb, menos de 1 CFU/mL de bacterias y menos de 0,03 de endotoxinas.
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