La cromatografía es una técnica que nos permite principalmente separar, identificar y cuantificar los componentes de una muestra mediante su interacción en dos fases: una fase estacionaria de gran área superficial, y una fase móvil.
¿Qué es la cromatografía líquida HPLC?
La cromatografía HPLC es un tipo particular de cromatografía líquida, las siglas HPLC son el acrónimo en inglés de High Performance Liquid Chromatography, que significa Cromatografía Líquida de alta resolución o alta eficiencia. La cromatografía HPLC se utiliza generalmente para la identificación de pequeñas moléculas, sin embargo, es capaz de separar macromoléculas y especies iónicas, productos naturales lábiles, materiales poliméricos y una gran variedad de otros grupos polifuncionales de alto peso molecular.
Esta técnica permite separar físicamente y cuantitativamente los distintos componentes de una solución por la absorción selectiva de los constituyentes de una mezcla, cuando los componentes pasan a través del sistema a diferentes velocidades, estos se separan en determinados tiempos. Cada componente tiene un tiempo característico de paso a través del sistema cromatográfico, llamado tiempo de retención, la separación cromatográfica se logra cuando el tiempo de retención de la sustancia de interés o analito, difiere del resto de componentes de la muestra.
¿Qué equipos y materiales son necesarios para trabajar en HPLC?
Debemos tomar en consideración que previo al análisis por HPLC es necesario un proceso de preparación de la muestra; dependiendo del tipo a muestra a analizar se pueden requerir diferentes equipos e instrumentos, sin embargo, los equipos que generalmente se utilizan en esta etapa son los siguientes:
- Balanza analítica
- Plato de agitación y calentamiento
- Baños de agua o baño maría
- Baño ultrasónico digital
- Molino Multiuso
- Centrífugas
- Vórtex
Insumos
- Balones aforados
- Matraces Erlenmeyer
- Embudos y Papel filtro
- Vasos de precipitado
- Filtros para jeringa
- Viales para HPLC
- Botellas para solventes
Una vez superada la etapa de preparación se procede con la etapa denominada instrumental. Al ser un tipo de cromatografía líquida, la fase móvil será un líquido mientras que la fase estacionaria será un sólido, concretamente una columna cromatográfica. El equipo para HPLC está conformado por los siguientes componentes básicos:
Un depósito para la fase móvil
Los solventes que conforman la fase móvil por lo general son contenidos en botellas de vidrio, los equipos HPLC cuentan con un espacio o compartimento para colocarlos.
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Otorgará la presión necesaria para transportar la fase móvil a través del sistema cromatográfico, funcionan con sistemas de pistones y según su capacidad de transportar uno o más solventes pueden ser bombas primarias, binarias, terciarias o cuaternarias. Los sistemas más utilizados contienen bombas cuaternarias.
Un sistema de inyección de Muestras
Consiste en un módulo que contiene esencialmente una aguja y una bandeja porta muestras, la aguja se encarga de tomar la cantidad de muestra requerida para el análisis. Debido a que los sistemas actuales cuentan con inyectores automáticos la reproducibilidad de los ensayos es muy precisa.
Es un compartimento especial para colocar la columna cromatográfica, esta columna es el corazón del sistema cromatográfico pues contiene la fase estacionaria y es aquí donde se produce la retención y separación de los diferentes compuestos.
En el horno en cambio, se puede programar diferentes temperaturas para colocar y acondicionar la columna.
Se trata de un sistema óptico, generalmente un arreglo de diodos con detección UV-Vis, que muestra la señal óptica emitida por los compuestos separados en la muestra, por lo tanto, estos compuestos deben presentar cierta actividad óptica para que puedan ser detectados por el instrumento, por esta razón existen distintos tipos de detectores según el tipo de muestra a analizar.
Una vez que la señal óptica es detectada por el instrumento, esta es enviada a un registrador de la señal, es decir, un software informático que traduce la señal en una imagen, adicionalmente este software permitirá ingresar todas las variables y de ese modo realizar los cálculos y cuantificar los compuestos analizados.
Labomersa cuenta con un amplio portafolio de productos para cumplir con sus requerimientos en cuanto a técnicas cromatográficas y de HPLC. Además, contamos con personal altamente capacitado para asesorarlo en la elección del instrumental correcto para sus análisis.
